전자 현미경 보고서
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작성일 23-05-13 20:27
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전자선이 시료를 투과할 때에 생기는 산란대조와 위상대조에 따라 상의 대조를 얻어낼 수 있다 초박절편법에서는 시료의 단편상(두께가 있는 3차원의 절편을 평면상)에 투영한 상을 observation한다. 초고압전자현미경에서 1μm 가량의 두꺼운 절편의 입체쌍사진을 촬영하는 것으로서 시료를 입체적으로 사용할 수 있다
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전자 현미경 보고서
조직 접수 → 고정 → overnight 냉장→ TEM용 시료(99%이상)/SEM용 시료(1년에 20case 이내) 제조 → 퇴근 전 포매처리, overnight (80℃에서 블록을 형성) → 다음날 trimming 해서 semithin section → ultrathin section → 전자염색 → 전자현미경 촬영 → sacn → 컴퓨터로 확인
① 1차 고정 : 2.5% glutaraldehyde in 0.1M phosphate buffer
✡ 투과전자현미경 (TEM : transmission electron microscopy)
- 목적 : 조직의 단면의 變化를 보기 위한 현미경
1. 고정
설명
* 방향성이 있는 조직 (muscle, nerve)과 여러 층으로 된 조직(피부, 혈관,
- 원리 : 전자선이 고진공 (10-5 Torr 이하) 상태에서 초박절편 (60~100㎚)에 조사되면 전자선의 흡수, 산란, 투과에 의해 형광판에 상을 맺음으로서 observation 할 수 있다 분해능이 수 nanometer(㎚)이고 전자를 광원으로 사용함에 따라 이를 위해서는 초박절편을 만들어야 하며, 따라서 단단한 물질로 조직을 포매 할 필요가 있고 높은 진공과 전자빔에 견딜 수 있는 재질을 요구한다.
- 자가융해에 의한 變化를 최소화하기 위해 신속한 고정이 필요.
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< 전체적인 과정 > TEM용과 SEM용을 구별하여 준비
평광한 전자선을 사용하여 시료를 투과시킨 전자선을 전자렌즈로 확대하여 observation하는 전자현미경. 직접배율의 범위가 통상은 100배에서 100만배가량의 상을 형광판 상에 투영하여 observation해 초미입자의 전자현미경용 필름에 기록한다. 또 회절상에 의한 결정구조의 분석에서도 가능하다. 동결레프리타법은 막구조의 분석에 적합하다.
* 고정성은 좋으나 침투력이 낮아 조직을 세절 (1mm3 ) 해야함.
전자현미경,현미경
< 전체적인 과정 > TEM용과 SEM용을 구별하여 준비 조직 접수 → 고정 → overnight 냉장→ TEM용 시료(99%이상)/SEM용 시료(1년에 20case 이내) 제조 → 퇴근 전 포매처리, overnight (80℃에서 블록을 형성) → 다음날 trimming 해서 semithin section → ultrathin section → 전자염색 → 전자현미경 촬영 → sacn → 컴퓨터로 확인
다. 바이러스 등의 외형이나 미세한 표면구조를 조사하는 방법으로서 음성염색법이 있다 저각도 투영법을 사용하면 정제한 핵산이나 단백질 등의 분포는 면역전자현미경법으로 분석한다.
